kpcczКомплексные проблемы сердечно-сосудистых заболеванийComplex Issues of Cardiovascular Diseases2306-12782587-9537Federal State Budgetary Institution “Research Institute for Complex Issues of Cardiovascular Diseases”10.17802/2306-1278-2024-13-4S-150-158kpccz-1373Research ArticleОРИГИНАЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ. Трансплантология и искусственные органыТКАНЕИНЖЕНЕРНЫЙ МАТРИКС НА ОСНОВЕ ФИБРОИНА ШЕЛКА ДЛЯ СЕРДЕЧНО-СОСУДИСТОЙ ХИРУРГИИTISSUE ENGINEERED MATRIX BASED ON SILK FIBROIN FOR CARDIOVASCULAR SURGERYhttps://orcid.org/0000-0002-9430-937XСенокосоваЕвгения АндреевнаSenokosovaEvgenia A.

кандидат биологических наук заведующая лабораторией клеточных технологий отдела экспериментальной медицины федерального государственного бюджетного научного учреждения «Научно-исследовательский институт комплексных проблем сердечно-сосудистых заболеваний», Кемерово, Российская Федерация

PhD, Researcher at the Laboratory of Cell Technologies, Department of Experimental Medicine, Federal State Budgetary Institution “Research Institute for Complex Issues of Cardiovascular Diseases”, Kemerovo, Russian Federation

sergeewa.ew@yandex.ruhttps://orcid.org/0000-0002-4146-3373МатвееваВера ГеннадьевнаMatveevaVera G.

кандидат медицинских наук старший научный сотрудник лаборатории клеточных технологий отдела экспериментальной медицины федерального государственного бюджетного научного учреждения «Научно-исследовательский институт комплексных проблем сердечно-сосудистых заболеваний», Кемерово, Российская Федерация

PhD, Senior Researcher at the Laboratory of Cell and Tissue Engineering, Department of Experimental Medicine, Federal State Budgetary Institution “Research Institute for Complex Issues of Cardiovascular Diseases”, Kemerovo, Russian Federation

matvvg@kemcardio.ruhttps://orcid.org/0000-0002-1991-6516ПрокудинаЕкатерина СергеевнаProkudinaEkaterina S.

кандидат медицинских наук научный сотрудник лаборатории тканевой инженерии и внутрисосудистой визуализации отдела хирургии сердца и сосудов федерального государственного бюджетного научного учреждения «Научно-исследовательский институт комплексных проблем сердечно-сосудистых заболеваний», Кемерово, Российская Федерация

PhD, Researcher, Laboratory of Tissue Engineering and Intravascular visualization, Department of Heart and Vascular Surgery, Federal State Budgetary Institution “Research Institute for Complex Issues of Cardiovascular Diseases”, Kemerovo, Russian Federation

goddess27@mail.ruhttps://orcid.org/0000-0002-8826-9244ХановаМарьям ЮрисовнаKhanovaMaryam Yu.

кандидат биологических наук научный сотрудник лаборатории клеточных технологий отдела экспериментальной медицины федерального государственного бюджетного научного учреждения «Научно-исследовательский институт комплексных проблем сердечно-сосудистых заболеваний», Кемерово, Российская Федерация

PhD, Junior Researcher at the Laboratory of Cell Technologies, Department of Experimental Medicine, Federal State Budgetary Institution “Research Institute for Complex Issues of Cardiovascular Diseases”, Kemerovo, Russian Federation

hanomu@kemcardio.ruhttps://orcid.org/0000-0002-2500-2147КривкинаЕвгения ОлеговнаKrivkinaEvgenia O.

младший научный сотрудник лаборатории клеточных технологий отдела экспериментальной медицины федерального государственного бюджетного научного учреждения «Научно-исследовательский институт комплексных проблем сердечно-сосудистых заболеваний», Кемерово, Российская Федерация

Junior Researcher at the Laboratory of Cell Technologies, Department of Experimental Medicine, Federal State Budgetary Institution “Research Institute for Complex Issues of Cardiovascular Diseases”, Kemerovo, Russian Federation

kriveo@kemcardio.ruhttps://orcid.org/0000-0002-8846-5077МироновАндрей ВладимировичMironovAndrey V.

кандидат медицинских наук младший научный сотрудник лаборатории клеточных технологий отдела экспериментальной медицины федерального государственного бюджетного научного учреждения «Научно-исследовательский институт комплексных проблем сердечно-сосудистых заболеваний», Кемерово, Российская Федерация

PhD, Junior Researcher at the Laboratory of Cell Technologies, Department of Experimental Medicine, Federal State Budgetary Institution “Research Institute of Complex Issues of Cardiovascular Diseases”, Kemerovo, Russian Federation

miroav@kemcardio.ruhttps://orcid.org/0000-0003-2404-2873ОнищенкоПавел СергеевичOnischchenkoPavel S.

младший научный сотрудник лаборатории новых биоматериалов отдела экспериментальной медицины федерального государственного бюджетного научного учреждения «Научно-исследовательский институт комплексных проблем сердечно-сосудистых заболеваний», Кемерово, Российская Федерация

Junior Researcher at the Laboratory of New Biomaterials, Department of Experimental Medicine, Federal State Budgetary Institution “Research Institute of Complex Issues of Cardiovascular Diseases”, Kemerovo, Russian Federation

onisps@kemcardio.ruhttps://orcid.org/0000-0002-5558-3229МухамадияровРинат АвхадиевичMukhamadiyarovRinat A.

кандидат биологических наук старший научный сотрудник лаборатории молекулярной, трансляционной и цифровой медицины федерального государственного бюджетного научного учреждения «Научно-исследовательский институт комплексных проблем сердечно-сосудистых заболеваний», Кемерово, Российская Федерация

PhD, Senior Researcher, Laboratory of Molecular, Translational, and Digital Medicine, Department of Experimental Medicine, Federal State Budgetary Institution “Research Institute for Complex Issues of Cardiovascular Diseases”, Kemerovo, Russian Federation

muhara@kemcardio.ruhttps://orcid.org/0000-0002-8874-0788АнтоноваЛариса ВалерьевнаAntonovaLarisa V.

доктор медицинских наук ведущий научный сотрудник лаборатории клеточных технологий отдела экспериментальной медицины федерального государственного бюджетного научного учреждения «Научно-исследовательский институт комплексных проблем сердечно-сосудистых заболеваний», Кемерово, Российская Федерация

PhD, Leading Researcher at the Laboratory of Cell Technologies, Department of Experimental Medicine, Federal State Budgetary Institution “Research Institute for Complex Issues of Cardiovascular Diseases”, Kemerovo, Russian Federation

antolv@kemcardio.ruФедеральное государственное бюджетное научное учреждение «Научно-исследовательский институт комплексных проблем сердечно-сосудистых заболеваний»РоссияFederal State Budgetary Institution “Research Institute for Complex Issues of Cardiovascular Diseases”Russian Federation202428122024134S150158Copyright © Сенокосова Е.А., Матвеева В.Г., Прокудина Е.С., Ханова М.Ю., Кривкина Е.О., Миронов А.В., Онищенко П.С., Мухамадияров Р.А., Антонова Л.В., 20252025Сенокосова Е.А., Матвеева В.Г., Прокудина Е.С., Ханова М.Ю., Кривкина Е.О., Миронов А.В., Онищенко П.С., Мухамадияров Р.А., Антонова Л.В.Senokosova E.A., Matveeva V.G., Prokudina E.S., Khanova M.Y., Krivkina E.O., Mironov A.V., Onischchenko P.S., Mukhamadiyarov R.A., Antonova L.V.This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.https://www.nii-kpssz.com/jour/article/view/1373Основные положения

Основные положения

Отработан метод получения пористого нетканого материала на основе фиброина шелка. Изучены его структурные и физико-механические свойства. Установлено, что полученный материал по своим характеристикам схож с нативной артерией и поэтому имеет высокий потенциал в сосудистой тканевой инженерии.   

 

 

Аннотация

Аннотация

Актуальность

Актуальность. Природный полимер фиброин шелка (ФШ), получаемый из коконов тутового шелкопряда, является перспективным биоматериалом. Возможность подбора методов тканевой инженерии позволяет получать 3D-каркасы на основе ФШ для изделий сердечно-сосудистого профиля.   

Цель

Цель. Изготовить пористый матрикс на основе регенерированного ФШ и исследовать его структурные и физико-механические характеристики.

Материалы и методы

Материалы и методы. Шелк рафинировали в щелочном растворе с дальнейшим растворением в LiBr, диализом и лиофильной сушкой до получения губок. Матриксы на основе 15, 18 и 20% ФШ в гексафторизопропаноле изготавливали методом электроспиннинга. Формирование водонерастворимой структуры β-листа ФШ осуществляли инкубацией в этаноле, метаноле или изопропаноле. Изучали структуру поверхности и среза матриксов методом сканирующей электронной микроскопии. Оценили физико-механические характеристики на универсальной разрывной машине.

Результаты

Результаты. Оптимальным для изготовления матриксов из 15% раствора ФШ явился следующий режим электроспиннинга: напряжение 20 кВ, скорость подачи раствора 1,0 мл/ч, скорость вращения коллектора 200 об/мин, игла 22 G, расстояние до коллектора 15 см, влажность 65%, температура в помещении 23 °С. Полученный матрикс состоял из волокон уплощенной формы шириной 4,84 (4,20; 5,47) мкм с малым количеством неглубоких пор диаметром 8, 65 (5,01; 11,13) мкм. В толще стенки матрикс содержал волокна диаметром 11,70 (10,04; 13,90) мкм, которые при своем переплетении формировали поры диаметром 4,89 (4,46; 6,05) мкм. Инкубация образцов в 70% этаноле позволила сформировать водорастворимую форму ФШ-матрикса, по физико-механическим свойствам максимально приближенного к аналогичным свойствам сонной артерии овцы.  

Заключение

Заключение. Разработан пористый 3D-матрикс на основе 15% ФШ с удовлетворительными структурными и физико-механическими характеристиками, схожими с параметрами нативных сосудов. Необходимо расширение исследований in vitro для детального изучения характеристик изготовленного материала и дальнейшего тестирования на моделях in vivo.   

Highlights

Highlights

The article reports on the progress in the development of a method for producing porous nonwoven material based on silk fibroin, and the following study of its structural, physical, and mechanical properties. The findings indicate that the obtained material is similar in its characteristics to the native artery thus proving that silk fibroin has a high potential in vascular tissue engineering.

 

 

Abstract

Abstract

Background

Background. Natural polymer – silk fibroin, obtained from silkworm cocoons, is a promising biomaterial. Tissue engineering has allowed us to obtain 3D-scaffolds based on silk fibroin for cardiovascular surgery.

Aim

Aim. To make a porous matrix based on regenerated silk fibroin (SF) and to study its characteristics in vitro.

Methods

Methods.  Silk was refined in an alkaline solution with further dissolution in LiBr, dialysis and freeze drying to obtain sponges. Matrices based on 15%, 18% and 20% SF in hexafluoroisopropanol were manufactured by electrospinning. By incubation in ethanol, methanol or isopropanol the β-sheet of SF was made water-insoluble. The structure of the matrix surface and the cross-section were studied by scanning electron microscopy. Physical and mechanical characteristics were evaluated using a universal bursting strength tester.

Results

Results. The optimal electrospinning parameters for 15% solution were as follows: needle 22 G; tip to collector 15 cm; voltage 20 kV; solution feed rate 1.0 mL/h; rotational speed of 200 rpm; humidity 65% and room temperature 23 °C. The obtained matrix had “flat fibers” with a width of 4.84 (4.20; 5.47) microns and a small number of shallow pores with a diameter of 8.65 (5.01; 11.13) microns. The walls of the matrix consisted of fibers with a diameter of 11.70 (10.04; 13.90) microns with a large number of pores with a diameter of 4.89 (4.46; 6.05) microns. Incubation of samples in 70% ethanol allowed us to form a non-water-soluble form of the SF matrix that has physical and mechanical characteristics comparable to sheep carotid arteries.

Conclusion

Conclusion. We have developed a porous 3D matrix based on 15% silk fibroin with satisfactory structural, physical and mechanical characteristics. It is necessary to further conduct in vitro studies to fully understand the characteristics of the manufactured material for further testing on in vivo models.

Фиброин шёлкаТканеинженерный матриксЭлектроспиннингSilk fibroinTissue-engineered matrixElectrospinningИсследование выполнено в рамках гранта Фонда поддержки молодых ученых в области биомедицинских наук № 2022_3 «Разработка тканеинженерного сосудистого протеза малого диаметра с усиленным внешним слоем, проангиогенными факторами, атромбогенным лекарственным покрытием и оценка его эффективности на модели овцы».ReferencesFang G., Sapru S., Behera S., Yao J., Shao Z., Kundu S.C., Chen X. Exploration of the tight structural-mechanical relationship in mulberry and non-mulberry silkworm silks. J Mater Chem B. 2016; 4(24):4337-4347. doi:10.1039/c6tb01049k.Fang G., Sapru S., Behera S., Yao J., Shao Z., Kundu S.C., Chen X. Exploration of the tight structural-mechanical relationship in mulberry and non-mulberry silkworm silks. J Mater Chem B. 2016; 4(24):4337-4347. doi:10.1039/c6tb01049k.Sun W., Gregory D.A., Tomeh M.A., Zhao X. Silk Fibroin as a Functional Biomaterial for Tissue Engineering. Int J Mol Sci. 2021; 22(3):1499. doi:10.3390/ijms22031499.Sun W., Gregory D.A., Tomeh M.A., Zhao X. Silk Fibroin as a Functional Biomaterial for Tissue Engineering. Int J Mol Sci. 2021; 22(3):1499. doi:10.3390/ijms22031499.Holland C., Numata K., Rnjak-Kovacina J., Seib F.P. The Biomedical Use of Silk: Past, Present, Future. Adv Healthc Mater. 2019; 8(1):e1800465. doi:10.1002/adhm.201800465.Holland C., Numata K., Rnjak-Kovacina J., Seib F.P. The Biomedical Use of Silk: Past, Present, Future. Adv Healthc Mater. 2019; 8(1):e1800465. doi:10.1002/adhm.201800465.Cheng G., Davoudi Z., Xing X., Yu X., Cheng X., Li Z., Deng H., Wang Q. Advanced Silk Fibroin Biomaterials for Cartilage Regeneration. ACS Biomater Sci Eng. 2018;4(8):2704-2715. doi:10.1021/acsbiomaterials.8b00150.Cheng G., Davoudi Z., Xing X., Yu X., Cheng X., Li Z., Deng H., Wang Q. Advanced Silk Fibroin Biomaterials for Cartilage Regeneration. ACS Biomater Sci Eng. 2018;4(8):2704-2715. doi:10.1021/acsbiomaterials.8b00150.Sahu N., Pal S., Sapru S., Kundu J., Talukdar S., Singh N.I., Yao J., Kundu S.C. Non-Mulberry and Mulberry Silk Protein Sericins as Potential Media Supplement for Animal Cell Culture. Biomed Res Int. 2016; 2016:7461041. doi:10.1155/2016/7461041.Sahu N., Pal S., Sapru S., Kundu J., Talukdar S., Singh N.I., Yao J., Kundu S.C. Non-Mulberry and Mulberry Silk Protein Sericins as Potential Media Supplement for Animal Cell Culture. Biomed Res Int. 2016; 2016:7461041. doi:10.1155/2016/7461041.Rockwood D.N., Preda R.C., Yücel T., Wang X., Lovett M.L., Kaplan D.L. Materials fabrication from Bombyx mori silk fibroin. Nat Protoc. 2011; 22;6(10):1612-31.Rockwood D.N., Preda R.C., Yücel T., Wang X., Lovett M.L., Kaplan D.L. Materials fabrication from Bombyx mori silk fibroin. Nat Protoc. 2011; 22;6(10):1612-31.doi:10.1038/nprot.2011.379.doi:10.1038/nprot.2011.379.Food and Agriculture Organization of the Unied nations [internet]. Available at: http://fao.org (accessed 15.10.2023).Food and Agriculture Organization of the Unied nations [internet]. Available at: http://fao.org (accessed 15.10.2023).Qi Y., Wang H., Wei K., Yang Y., Zheng R.Y., Kim I.S., Zhang K.Q. A Review of Structure Construction of Silk Fibroin Biomaterials from Single Structures to Multi-Level Structures. Int J Mol Sci. 2017;18(3):237. doi:10.3390/ijms18030237.Qi Y., Wang H., Wei K., Yang Y., Zheng R.Y., Kim I.S., Zhang K.Q. A Review of Structure Construction of Silk Fibroin Biomaterials from Single Structures to Multi-Level Structures. Int J Mol Sci. 2017;18(3):237. doi:10.3390/ijms18030237.Inoue S., Tanaka K., Arisaka F., Kimura S., Ohtomo K., Mizuno S. Silk fibroin of Bombyx mori is secreted, assembling a high molecular mass elementary unit consisting of H-chain, L-chain, and P25, with a 6:6:1 molar ratio. J Biol Chem. 2000;275(51):40517-28. doi:10.1074/jbc.M006897200.Inoue S., Tanaka K., Arisaka F., Kimura S., Ohtomo K., Mizuno S. Silk fibroin of Bombyx mori is secreted, assembling a high molecular mass elementary unit consisting of H-chain, L-chain, and P25, with a 6:6:1 molar ratio. J Biol Chem. 2000;275(51):40517-28. doi:10.1074/jbc.M006897200.Melke J., Midha S., Ghosh S., Ito K., Hofmann S. Silk fibroin as biomaterial for bone tissue engineering. Acta Biomater. 2016;31:1-16. doi:10.1016/j.actbio.2015.09.005.Melke J., Midha S., Ghosh S., Ito K., Hofmann S. Silk fibroin as biomaterial for bone tissue engineering. Acta Biomater. 2016;31:1-16. doi:10.1016/j.actbio.2015.09.005.Антонова Л.В., Кривкина Е.О., Резвова М.А., Севостьянова В.В., Миронов А.В., Глушкова Т.В., Клышников К.Ю., Овчаренко Е.А., Кудрявцева Ю.А., Барбараш Л.С. Биодеградируемый сосудистый протез с армирующим внешним каркасом. Комплексные проблемы сердечно-сосудистых заболеваний. 2019;8(2):87-97. doi:10.17802/2306-1278-2019-8-2-87-97.Antonova L.V., Krivkina E.O., Rezvova M.A., Sevost'yanova V.V., Mironov A.V., Glushkova T.V., Klyshnikov K.Yu., Ovcharenko E.A., Kudryavceva Yu.A., Barbarash L.S. Biodegradable vascular graft reinforced with a biodegradable sheath. Complex Issues of Cardiovascular Diseases. 2019;8(2):87-97. doi:10.17802/2306-1278-2019-8-2-87-97. (In Russian)Durán-Rey D., Brito-Pereira R., Ribeiro C., Ribeiro S., Sánchez-Margallo J.A., Crisóstomo V., Irastorza I., Silván U., Lanceros-Méndez S., Sánchez-Margallo F.M. Development of Silk Fibroin Scaffolds for Vascular Repair. Biomacromolecules. 2023;24(3):1121-1130. doi:10.1021/acs.biomac.2c01124.Durán-Rey D., Brito-Pereira R., Ribeiro C., Ribeiro S., Sánchez-Margallo J.A., Crisóstomo V., Irastorza I., Silván U., Lanceros-Méndez S., Sánchez-Margallo F.M. Development of Silk Fibroin Scaffolds for Vascular Repair. Biomacromolecules. 2023;24(3):1121-1130. doi:10.1021/acs.biomac.2c01124.Settembrini A., Buongiovanni G., Settembrini P., Alessandrino A., Freddi G., Vettor G., Martelli E. In-vivo evaluation of silk fibroin small-diameter vascular grafts: state of art of preclinical studies and animal models. Front Surg. 2023;10:1090565. doi: 10.3389/fsurg.2023.1090565.Settembrini A., Buongiovanni G., Settembrini P., Alessandrino A., Freddi G., Vettor G., Martelli E. In-vivo evaluation of silk fibroin small-diameter vascular grafts: state of art of preclinical studies and animal models. Front Surg. 2023;10:1090565. doi: 10.3389/fsurg.2023.1090565.Dingle Y.L., Bonzanni M., Liaudanskaya V., Nieland T.J.F., Kaplan D.L. Integrated functional neuronal network analysis of 3D silk-collagen scaffold-based mouse cortical culture. STAR Protoc. 2021;2(1):100292. doi:10.1016/j.xpro.2020.100292.Dingle Y.L., Bonzanni M., Liaudanskaya V., Nieland T.J.F., Kaplan D.L. Integrated functional neuronal network analysis of 3D silk-collagen scaffold-based mouse cortical culture. STAR Protoc. 2021;2(1):100292. doi:10.1016/j.xpro.2020.100292.Chen Y., Yang W., Wang W., Zhang M., Li M. Bombyx mori Silk Fibroin Scaffolds with Antheraea pernyi Silk Fibroin Micro/Nano Fibers for Promoting EA. hy926 Cell Proliferation. Materials (Basel). 2017;10(10):1153. doi:10.3390/ma10101153.Chen Y., Yang W., Wang W., Zhang M., Li M. Bombyx mori Silk Fibroin Scaffolds with Antheraea pernyi Silk Fibroin Micro/Nano Fibers for Promoting EA. hy926 Cell Proliferation. Materials (Basel). 2017;10(10):1153. doi:10.3390/ma10101153.Zhao H., Ren X., Zhang Y., Huang L. Influence of self-assembly regenerated silk fibroin nanofibers on the properties of electrospun materials. Biomed Mater Eng. 2015;26(1):S89-94. doi:10.3233/BME-151293.Zhao H., Ren X., Zhang Y., Huang L. Influence of self-assembly regenerated silk fibroin nanofibers on the properties of electrospun materials. Biomed Mater Eng. 2015;26(1):S89-94. doi:10.3233/BME-151293.Roblin N.V., DeBari M.K., Shefter S.L., Iizuka E., Abbott R.D. Development of a More Environmentally Friendly Silk Fibroin Scaffold for Soft Tissue Applications. J Funct Biomater. 2023;14(4):230. doi:10.3390/jfb14040230.Roblin N.V., DeBari M.K., Shefter S.L., Iizuka E., Abbott R.D. Development of a More Environmentally Friendly Silk Fibroin Scaffold for Soft Tissue Applications. J Funct Biomater. 2023;14(4):230. doi:10.3390/jfb14040230.Furuzono T., Kishida A., Tanaka J.. Nano-scaled hydroxyapatite/polymer composite I. Coating of sintered hydroxyapatite particles on poly(gamma-methacryloxypropyl trimethoxysilane)grafted silk fibroin fibers through chemical bonding. J Mater Sci Mater Med. 2004;15(1):19-23. doi:/10.1023/b:jmsm.0000010093.39298.5a.Furuzono T., Kishida A., Tanaka J.. Nano-scaled hydroxyapatite/polymer composite I. Coating of sintered hydroxyapatite particles on poly(gamma-methacryloxypropyl trimethoxysilane)grafted silk fibroin fibers through chemical bonding. J Mater Sci Mater Med. 2004;15(1):19-23. doi:/10.1023/b:jmsm.0000010093.39298.5a.Patil P.P., Reagan M.R., Bohara R.A. Silk fibroin and silk-based biomaterial derivatives for ideal wound dressings. Int J Biol Macromol. 2020; 164:4613-4627.Patil P.P., Reagan M.R., Bohara R.A. Silk fibroin and silk-based biomaterial derivatives for ideal wound dressings. Int J Biol Macromol. 2020; 164:4613-4627.doi:10.1016/j.ijbiomac.2020.08.041.doi:10.1016/j.ijbiomac.2020.08.041.Bosio V.E., Brown J., Rodriguez M.J., Kaplan D.L. Biodegradable Porous Silk Microtubes for Tissue Vascularization. J Mater Chem B. 2017;5(6):1227-1235.Bosio V.E., Brown J., Rodriguez M.J., Kaplan D.L. Biodegradable Porous Silk Microtubes for Tissue Vascularization. J Mater Chem B. 2017;5(6):1227-1235.doi:10.1039/C6TB02712A.doi:10.1039/C6TB02712A.Aytemiz D., Fukuda Y., Higuchi A., Asano A., Nakazawa C.T., Kameda T., Yoshioka T., Nakazawa Y. Compatibility Evaluation of Non-Woven Sheet Composite of Silk Fibroin and Polyurethane in the Wet State. Polymers (Basel). 2018;10(8):874.Aytemiz D., Fukuda Y., Higuchi A., Asano A., Nakazawa C.T., Kameda T., Yoshioka T., Nakazawa Y. Compatibility Evaluation of Non-Woven Sheet Composite of Silk Fibroin and Polyurethane in the Wet State. Polymers (Basel). 2018;10(8):874.doi:10.3390/polym10080874.doi:10.3390/polym10080874.Wang Y., Blasioli D.J., Kim H.J., Kim H.S., Kaplan D.L. Cartilage tissue engineering with silk scaffolds and human articular chondrocytes. Biomaterials. 2006;27(25):4434-42. do:10.1016/j.biomaterials.2006.03.050.Wang Y., Blasioli D.J., Kim H.J., Kim H.S., Kaplan D.L. Cartilage tissue engineering with silk scaffolds and human articular chondrocytes. Biomaterials. 2006;27(25):4434-42. do:10.1016/j.biomaterials.2006.03.050.Zhao M., Qi Z., Tao X., Newkirk C., Hu X., Lu S. Chemical, Thermal, Time, and Enzymatic Stability of Silk Materials with Silk I Structure. Int J Mol Sci. 2021;22(8):4136. https://doi:10.3390/ijms22084136.Zhao M., Qi Z., Tao X., Newkirk C., Hu X., Lu S. Chemical, Thermal, Time, and Enzymatic Stability of Silk Materials with Silk I Structure. Int J Mol Sci. 2021;22(8):4136. https://doi:10.3390/ijms22084136.

The authors declare that there are no conflicts of interest present.