kpcczКомплексные проблемы сердечно-сосудистых заболеванийComplex Issues of Cardiovascular Diseases2306-12782587-9537Federal State Budgetary Institution “Research Institute for Complex Issues of Cardiovascular Diseases”10.17802/2306-1278-2024-13-3-182-192kpccz-1379Research ArticleОНЛАЙН. ОРИГИНАЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ. Патологическая физиологияONLINE. ORIGINAL STUDIES. Pathological physiologyИССЛЕДОВАНИЕ ВЛИЯНИЯ ОБРАБОТКИ АЛЛО- И КСЕНОГЕННЫХ БИОМАТЕРИАЛОВ В СУБ- И СВЕРХКРИТИЧЕСКОМ ДИОКСИДЕ УГЛЕРОДА НА СПОСОБНОСТЬ К ПОДАВЛЕНИЮ КАЛЬЦИНОЗАINVESTIGATION OF THE EFFECT OF PROCESSING ALLOGENEIC AND XENOGENIC BIOMATERIALS IN SUB- AND SUPERCRITICAL CARBON DIOXIDE ON THE ABILITY TO SUPPRESS CALCIFICATIONhttps://orcid.org/0009-0008-4964-468XПерепёлкинЕвгений ИгоревичPerepelkinEvgeny I.

аспирант федерального государственного бюджетного учреждения науки Институт элементоорганических соединений им. А.Н. Несмеянова Российской академии наук (ИНЭОС РАН), Москва, Российская Федерация

Postgraduate Student, Federal State Budgetary Institution of Science “A.N. Nesmeyanov Institute of Organoelement Compounds” of the Russian Academy of Sciences, Moscow, Russian Federation

https://orcid.org/0000-0001-8958-1400ЗубкоАлександр ВладимировичBritikovDmitry V.

кандидат медицинских наук заведующий группой клеточных технологий и молекулярно-генетических исследований отдела научных разработок и опытного производства медицинских изделий для сердечно-сосудистой хирургии федерального государственного бюджетного учреждения «Национальный медицинский исследовательский центр сердечно-сосудистой хирургии им. А.Н. Бакулева» Министерства здравоохранения Российской Федерации, Москва, Российская Федерация

PhD, Leading Researcher at the Department of Development and Pilot Production of Medical Devices for Cardiovascular Surgery, Federal State Budgetary Institution “A.N. Bakulev National Medical Research Center for Cardiovascular Surgery” of the Ministry of Health of the Russian Federation, Moscow, Russian Federation

https://orcid.org/0000-0002-6942-6611БритиковДмитрий ВячеславовичZubkoAlexander V.

доктор медицинских наук ведущий научный сотрудник отдела научных разработок и опытного производства медицинских изделий для сердечно-сосудистой хирургии федерального государственного бюджетного учреждения «Национальный медицинский исследовательский центр сердечно-сосудистой хирургии им. А.Н. Бакулева» Министерства здравоохранения Российской Федерации, Москва, Российская Федерация

PhD, Head of the Group for Cellular Technologies and Molecular Genetics Research, Department of Development and Pilot Production of Medical Devices for Cardiovascular Surgery, Federal State Budgetary Institution “A.N. Bakulev National Medical Research Center for Cardiovascular Surgery” of the Ministry of Health of the Russian Federation, Moscow, Russian Federation

https://orcid.org/0000-0003-1372-7180ЧащинИван СергеевичChashchinIvan S.

кандидат физико-математических наук старший научный сотрудник федерального государственного бюджетного учреждения науки Институт элементоорганических соединений им. А.Н. Несмеянова Российской академии наук (ИНЭОС РАН), Москва, Российская Федерация; ведущий технолог лаборатории аллогенных материалов для сердечно-сосудистой хирургии федерального государственного бюджетного учреждения «Национальный медицинский исследовательский центр сердечно-сосудистой хирургии им. А.Н. Бакулева» Министерства здравоохранения Российской Федерации, Москва, Российская Федерация

PhD, Senior Researcher at the Federal State Budgetary Institution of Science “A.N. Nesmeyanov Institute of Organoelement Compounds” of the Russian Academy of Sciences, Moscow, Russian Federation; Leading Technologist at the Laboratory of Allogeneic Materials for Cardiovascular Surgery, Federal State Budgetary Institution “A.N. Bakulev National Medical Research Center for Cardiovascular Surgery” of the Ministry of Health of the Russian Federation, Moscow, Russian Federation

chaschin@polly.phys.msu.ruhttps://orcid.org/0000-0002-1119-5435БакулеваНаталия ПетровнаBakulevaNatalia P.

кандидат химических наук заведующая лабораторией биопротезов и полимерных материалов федерального государственного бюджетного учреждения «Национальный медицинский исследовательский центр сердечно-сосудистой хирургии им. А.Н. Бакулева» Министерства здравоохранения Российской Федерации, Москва, Российская Федерация

PhD, Head of the Laboratory of Bioprostheses and Polymer Materials, Federal State Budgetary Institution “A.N. Bakulev National Medical Research Center for Cardiovascular Surgery” of the Ministry of Health of the Russian Federation, Moscow, Russian Federation

https://orcid.org/0000-0003-3040-6901ДжиджихияКонстантине МалхазовичDzhihiyaKonstantin M.

кандидат медицинских наук заведующий лабораторией аллогенных материалов для сердечно-сосудистой хирургии федерального государственного бюджетного учреждения «Национальный медицинский исследовательский центр сердечно-сосудистой хирургии им. А.Н. Бакулева» Министерства здравоохранения Российской Федерации, Москва, Российская Федерация

PhD, Head of the Laboratory of Allogeneic Materials for Cardiovascular Surgery, Federal State Budgetary Institution “A.N. Bakulev National Medical Research Center for Cardiovascular Surgery” of the Ministry of Health of the Russian Federation, Moscow, Russian Federation

Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт элементоорганических соединений им. А.Н. Несмеянова Российской академии наук (ИНЭОС РАН)РоссияFederal State Budgetary Institution of Science “A. N. Nesmeyanov Institute of Organoelement Compounds” of Russian Academy of SciencesRussian FederationФедеральное государственное бюджетное учреждение «Национальный медицинский исследовательский центр сердечно-сосудистой хирургии им. А.Н. Бакулева» Министерства здравоохранения Российской ФедерацииРоссияFederal State Budgetary Institution “A.N. Bakulev National Medical Research Center for Cardiovascular Surgery” of the Russian Ministry of HealthRussian FederationФедеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт элементоорганических соединений им. А.Н. Несмеянова Российской академии наук (ИНЭОС РАН); Федеральное государственное бюджетное учреждение «Национальный медицинский исследовательский центр сердечно-сосудистой хирургии им. А.Н. Бакулева» Министерства здравоохранения Российской ФедерацииРоссияFederal State Budgetary Institution of Science “A. N. Nesmeyanov Institute of Organoelement Compounds” of Russian Academy of Sciences; Federal State Budgetary Institution “A.N. Bakulev National Medical Research Center for Cardiovascular Surgery” of the Russian Ministry of HealthRussian Federation202430092024133182192Copyright © Перепёлкин Е.И., Зубко А.В., Бритиков Д.В., Чащин И.С., Бакулева Н.П., Джиджихия К.М., 20242024Перепёлкин Е.И., Зубко А.В., Бритиков Д.В., Чащин И.С., Бакулева Н.П., Джиджихия К.М.Perepelkin E.I., Britikov D.V., Zubko A.V., Chashchin I.S., Bakuleva N.P., Dzhihiya K.M.This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.https://www.nii-kpssz.com/jour/article/view/1379Основные положения

Основные положения

 

 

Цель

Цель. Сравнительный анализ антикальцификационных свойств имплантатов на основе алло- и ксеноткани после обработки в сверх- и субкритическом диоксиде углерода (СО2).

Материалы и методы

Материалы и методы. Выполнена модификация сосудов крыс методом гибридной децеллюляризации в сверхкритическом СО2 с детергентами и перикарда телят методом прямого нанесения покрытия из хитозановых наночастиц с серебром из растворов воды, насыщенной диоксидом углерода под давлением (угольная кислота). Проведено исследование кальциноза на крысах (n = 10 для каждого типа образца) in vivo. Для моделирования поведения биоматериала в организме человека применен подход имплантации крысам их аллогенных модифицированных аорт. Для определения кальция в извлекаемых образцах использован спектрофотометрический метод оценки концентрации кальция. Для оценки цитотоксичности образцов перикарда с нанопокрытием – метод измерения импеданса клеток, заселенных на образцы биоматериалов.

Результаты

Результаты. Установлено, что обработка крысиных сосудов в сверхкритическом СО2 снижает отложения солей кальция на 30% по сравнению с исходным аллографтом. Для перикарда с покрытием из наночастиц хитозана характерно еще большее снижение кальциноза – биоматрица с покрытием на основе наночастиц хитозана с серебром содержит 0,015 ± 0,005 мас.% солей кальция, что значительно ниже, чем у ГА-стабилизированного перикарда (0,070 ± 0,015 мас.%) после эксперимента. Установлено, что биокомпозиты с нанопокрытием характеризуются приблизительно одинаковым клеточным индексом по сравнению с образцом ксеноткани без покрытия. Все образцы проявляли цитостатический эффект, в том числе с нанопокрытием, что доказывает инкапсуляцию серебра в полимерную матрицу и обеспечивает отсутствие негативного влияния на организм при нормальном функционировании. Покрытие биоматрикса на основе «пустых» наночастиц хитозана способствует увеличению пролиферации клеток.

Заключение

Заключение. Применение сверхкритической технологии для очистки биоматериалов, а также создания и нанесения полимерных протекторных покрытий с целью усиления способности к подавлению кальциноза представляется перспективным. Использование такого подхода модификации биопротезов является более выигрышной стратегией относительно стандартных общепринятых методов их химической модификации.

Highlights

Highlights

 

 

Aim

Aim. To conduct a comparative analysis of anticalcification properties of implants based on allo- and xeno-tissue after treatment in super- (scCO2) and subcritical carbon dioxide.

Methods

Methods. We have performed a modification of the following structures: a) rat vessels by hybrid decellularization in scCO2 with detergents b) calf pericardium by direct coating of chitosan nanoparticles with silver from the water/carbon dioxide system under pressure (carbonic acid). Following that we have performed an in vivo calcification study on rats (n = 10 for each type of sample). To model the behavior of biomaterial in the human body, we have implanted allogeneic modified aorta into rats. To determine the calcium in the extracted samples, we have used spectrophotometric method to estimate the concentration of calcium. To assess the cytotoxicity of nanocoated pericardium samples, we have measured the impedance of cells populated on biomaterial samples was used.

Results

Results. The treatment of rat vessels in supercritical CO2 reduces the deposition of calcium salts by 30% compared to baseline allografts. Pericardium coated with chitosan nanoparticles can be characterized by a significant decrease in calcification – the biomatrix coated with Cht_Ag/TPP contains only (0.015 ± 0.005) wt.% of calcium salts, which is significantly lower compared with GA-stabilized pericardium with (0.070 ± 0.015) wt.% after the experiment. Biocomposites with nanocoating are characterized by similar cellular index compared to a sample of uncoated xeno-tissue. All samples exhibit a cytostatic effect, including nanocoated samples (Cht_Ag/TPP), which proves the encapsulation of silver in the polymer matrix and ensures the absence of negative effects on the body during normal functioning. The coating of biomatrix based on hollow chitosan nanoparticles contributes to an increase in cell proliferation.

Conclusion

Conclusion. The use of supercritical technology for the purification of biomaterials, as well as the creation and application of polymer protective coatings in order to enhance the ability to suppress calcification looks very promising. At the same time, the use of such a “green” approach to the modification of bioprostheses is a more advantageous strategy relative to the standard generally accepted methods of their chemical modification.

АллографтыБиологические протезы клапанов сердцаКальцинозСверхкритические технологииЦитотоксичностьНаночастицыХитозанУгольная кислотаСверхкритический диоксид углеродаAllograftsBioprosthetic heart valvesCalcificationSupercritical technologiesCytotoxicityNanoparticlesChitosanCarbonic acidSupercritical carbon dioxideИсследование выполнено при поддержке гранта Российского научного фонда № 22-23-00559, https://rscf.ru/project/22 -23-00559.ReferencesMuzzio N., Moya S., Romero G. Multifunctional Scaffolds and Synergistic Strategies in Tissue Engineering and Regenerative Medicine. Pharmaceutics. 2021;13(6):792. doi: 10.3390/pharmaceutics13060792.Muzzio N., Moya S., Romero G. Multifunctional Scaffolds and Synergistic Strategies in Tissue Engineering and Regenerative Medicine. Pharmaceutics. 2021;13(6):792. doi: 10.3390/pharmaceutics13060792.Barratt-Boyes B.G., Christie G.W. What is the best bioprosthetic operation for the small aortic root?: allograft, autograft, porcine, pericardial? Stented or unstented?. J Card Surg. 1994;9(2 Suppl):158-164. doi:10.1111/j.1540-8191.1994.tb00917.x.Barratt-Boyes B.G., Christie G.W. What is the best bioprosthetic operation for the small aortic root?: allograft, autograft, porcine, pericardial? Stented or unstented?. J Card Surg. 1994;9(2 Suppl):158-164. doi:10.1111/j.1540-8191.1994.tb00917.x.Haziza F., Papouin G., Barratt-Boyes B., Christie G., Whitlock R. Tears in bioprosthetic heart valve leaflets without calcific degeneration. J Heart Valve Dis. 1996;5(1):35-39.Haziza F., Papouin G., Barratt-Boyes B., Christie G., Whitlock R. Tears in bioprosthetic heart valve leaflets without calcific degeneration. J Heart Valve Dis. 1996;5(1):35-39.Aldridge A., Desai A., Owston H., Jennings L., Fisher J., Rooney P., Kearney J., Ingham E., Wilshaw S. Development and characterisation of a large diameter decellularised vascular allograft. Cell Tissue Bank. 2018;9(3):287-300. doi: 10.1007/s10561-017-9673-y.Aldridge A., Desai A., Owston H., Jennings L., Fisher J., Rooney P., Kearney J., Ingham E., Wilshaw S. Development and characterisation of a large diameter decellularised vascular allograft. Cell Tissue Bank. 2018;9(3):287-300. doi: 10.1007/s10561-017-9673-y.Sulaiman N., Bond A., Bruno V., Joseph J., Johnson J., Suleiman M., George S., Ascione R. Effective decellularisation of human saphenous veins for biocompatible arterial tissue engineering applications: Bench optimisation and feasibility in vivo testing. J Tissue Eng. 2021; 29;12:2041731420987529. doi: 10.1177/2041731420987529.Sulaiman N., Bond A., Bruno V., Joseph J., Johnson J., Suleiman M., George S., Ascione R. Effective decellularisation of human saphenous veins for biocompatible arterial tissue engineering applications: Bench optimisation and feasibility in vivo testing. J Tissue Eng. 2021; 29;12:2041731420987529. doi: 10.1177/2041731420987529.Ohri R., Hahn S.K., Hoffman A.S., Stayton P.S., Giachelli C.M. Hyaluronic acid grafting mitigates calcification of glutaraldehyde-fixed bovine pericardium. J. Biomed. Mater. Res. 2004;70A:328-334. doi: 10.1002/jbm.a.30088.Ohri R., Hahn S.K., Hoffman A.S., Stayton P.S., Giachelli C.M. Hyaluronic acid grafting mitigates calcification of glutaraldehyde-fixed bovine pericardium. J. Biomed. Mater. Res. 2004;70A:328-334. doi: 10.1002/jbm.a.30088.Vasudev S.C., Moses L.R., Sharma C.P. Covalently bonded heparin to alter the pericardial calcification. Artif Cells Blood Substit Immobil Biotechnol. 2000;28(3):241-253. doi:10.3109/10731190009119355.Vasudev S.C., Moses L.R., Sharma C.P. Covalently bonded heparin to alter the pericardial calcification. Artif Cells Blood Substit Immobil Biotechnol. 2000;28(3):241-253. doi:10.3109/10731190009119355.Gilpin A., Yang Y. Decellularization strategies for regenerative medicine: from processing techniques to applications. Biomed. Res. Int. 2017;9831534. doi: 10.1155/2017/9831534.Gilpin A., Yang Y. Decellularization strategies for regenerative medicine: from processing techniques to applications. Biomed. Res. Int. 2017;9831534. doi: 10.1155/2017/9831534.Gilbert T., Badylak S. An overview of tissue and whole organ decellularization processes. Biomaterials. 2011;32:3233–3243. doi: 10.1016/j.biomaterials.2011.01.057.Gilbert T., Badylak S. An overview of tissue and whole organ decellularization processes. Biomaterials. 2011;32:3233–3243. doi: 10.1016/j.biomaterials.2011.01.057.Zhou J., Fritze O., Schleicher M., Wendel H-P., Schenke-Layland K., Harasztosi C., Hu S., Stock U. Impact of heart valve decellularization on 3-D ultrastructure, immunogenicity and thrombogenicity. Biomaterials. 2010;31:2549–2554. doi: 10.1016/j.biomaterials.2009.11.088.Zhou J., Fritze O., Schleicher M., Wendel H-P., Schenke-Layland K., Harasztosi C., Hu S., Stock U. Impact of heart valve decellularization on 3-D ultrastructure, immunogenicity and thrombogenicity. Biomaterials. 2010;31:2549–2554. doi: 10.1016/j.biomaterials.2009.11.088.Hwang J., San B., Turner N., White L., Faulk D., Badylak S., Li Y., Yu S. Molecular assessment of collagen denaturation in decellularized tissues using a collagen hybridizing peptide. Acta Biomater. 2017;53:268–278. doi: 10.1016/j.actbio.2017.01.079.Hwang J., San B., Turner N., White L., Faulk D., Badylak S., Li Y., Yu S. Molecular assessment of collagen denaturation in decellularized tissues using a collagen hybridizing peptide. Acta Biomater. 2017;53:268–278. doi: 10.1016/j.actbio.2017.01.079.Casali D., Handleton R., Shazly T., Matthews M. A novel supercritical CO2-based decellularization method for maintaining scaffold hydration and mechanical properties. J. Supercrit. Fluids. 2018;131:72–81. doi: 10.1016/j.supflu.2017.07.021.Casali D., Handleton R., Shazly T., Matthews M. A novel supercritical CO2-based decellularization method for maintaining scaffold hydration and mechanical properties. J. Supercrit. Fluids. 2018;131:72–81. doi: 10.1016/j.supflu.2017.07.021.Chaschin I., Khugaev G., Krasheninnikov S., Petlenko A., Badun G., Chernysheva M., Dzhidzhikhiya K., Bakuleva N. Bovine jugular vein valved conduit: a new hybrid method of devitalization and protection by chitosan-based coatings using super- and subrcritical CO2. Journal of Supercritical Fluids. 2020;164: 104893. doi: 10.1016/j.supflu.2020.104893.Chaschin I., Khugaev G., Krasheninnikov S., Petlenko A., Badun G., Chernysheva M., Dzhidzhikhiya K., Bakuleva N. Bovine jugular vein valved conduit: a new hybrid method of devitalization and protection by chitosan-based coatings using super- and subrcritical CO2. Journal of Supercritical Fluids. 2020;164: 104893. doi: 10.1016/j.supflu.2020.104893.Chaschin I., Britikov D., Khugaev G., Salokhedinova R., Zubko A., Abramchuk S., Petlenko A., Muratov R., Bakuleva N. Decellularization of the human donor aortic conduit by a new hybrid treatment in a multicomponent system with supercritical CO2 and Tween 80. Journal of Supercritical Fluids. 2022;180: 105452. doi: 10.1016/j.supflu.2021.105452.Chaschin I., Britikov D., Khugaev G., Salokhedinova R., Zubko A., Abramchuk S., Petlenko A., Muratov R., Bakuleva N. Decellularization of the human donor aortic conduit by a new hybrid treatment in a multicomponent system with supercritical CO2 and Tween 80. Journal of Supercritical Fluids. 2022;180: 105452. doi: 10.1016/j.supflu.2021.105452.Gott J.P., Girardot M.N., Girardot J.M., Hall J.D., Whitlark J.D., Horsley W.S., Dorsey L.M., Levy R.J., Chen W., Schoen F.J., Guyton R.A. Refinement of the alpha aminooleic acid bioprosthetic valve anticalcification technique. Ann Thorac Surg. 1997;64(1):50-58. doi:10.1016/s0003-4975(97)00118-5.Gott J.P., Girardot M.N., Girardot J.M., Hall J.D., Whitlark J.D., Horsley W.S., Dorsey L.M., Levy R.J., Chen W., Schoen F.J., Guyton R.A. Refinement of the alpha aminooleic acid bioprosthetic valve anticalcification technique. Ann Thorac Surg. 1997;64(1):50-58. doi:10.1016/s0003-4975(97)00118-5.Barbarash L.S., Zhuravleva I.Iu., Medvedeva V.M., Shaposhnikov A.N. Ways to prevent the calcification of heart valve bioprostheses. Biull Eksp Biol Med. 1988;106(12):732-734.Barbarash L.S., Zhuravleva I.Iu., Medvedeva V.M., Shaposhnikov A.N. Ways to prevent the calcification of heart valve bioprostheses. Biull Eksp Biol Med. 1988;106(12):732-734.Vasudev S.C., Chandy T., Sharma C.P., Mohanty M., Umasankar P.R. Synergistic effect of released aspirin/heparin for preventing bovine pericardial calcification. Artif Organs. 2000;24(2):129-136. doi:10.1046/j.1525-1594.2000.06348.x.Vasudev S.C., Chandy T., Sharma C.P., Mohanty M., Umasankar P.R. Synergistic effect of released aspirin/heparin for preventing bovine pericardial calcification. Artif Organs. 2000;24(2):129-136. doi:10.1046/j.1525-1594.2000.06348.x.Webb C.L., Flowers W.E., Horton C., Schoen F.J., Levy R.J. Long-term efficacy of Al3+ for prevention of bioprosthetic heart valve calcification. ASAIO Trans. 1990;36(3):M408-M410.Webb C.L., Flowers W.E., Horton C., Schoen F.J., Levy R.J. Long-term efficacy of Al3+ for prevention of bioprosthetic heart valve calcification. ASAIO Trans. 1990;36(3):M408-M410.Hirsch D., Drader J., Pathak Y.V., Yee R., Schoen F.J., Levy R.J. Synergistic inhibition of the calcification of glutaraldehyde pretreated bovine pericardium in a rat subdermal model by FeCl3 and ethanehydroxydiphosphonate: preincubation and polymeric controlled release studies. Biomaterials. 1993;14(9):705-711. doi:10.1016/0142-9612(93)90069-e.Hirsch D., Drader J., Pathak Y.V., Yee R., Schoen F.J., Levy R.J. Synergistic inhibition of the calcification of glutaraldehyde pretreated bovine pericardium in a rat subdermal model by FeCl3 and ethanehydroxydiphosphonate: preincubation and polymeric controlled release studies. Biomaterials. 1993;14(9):705-711. doi:10.1016/0142-9612(93)90069-e.Timchenko T.P. Bisphosphonates as potential inhibitors of calcification in bioprosthetic heart valves (Review). Sovrem Tekhnologii Med. 2022; 14(2):68-78. doi: 10.17691/stm2022.14.2.07.Timchenko T.P. Bisphosphonates as potential inhibitors of calcification in bioprosthetic heart valves (Review). Sovrem Tekhnologii Med. 2022; 14(2):68-78. doi: 10.17691/stm2022.14.2.07.Chaschin I., Sinolits M., G.A. Badun G., Chernysheva M., Anuchina N., Krasheninnikov S., Khugaev G., Petlenko A., Britikov D., Zubko A., Kurilov A., Dreger E., Bakuleva N. Chitosan/hyaluronic acid polyanion bilayer applied from carbon acid as an advanced coating with intelligent antimicrobial properties for improved biological prosthetic heart valves. International Journal of Biological Macromolecules. 2022; 222:2761–2774. doi: 10.1016/j.ijbiomac.2022.10.056.Chaschin I., Sinolits M., G.A. Badun G., Chernysheva M., Anuchina N., Krasheninnikov S., Khugaev G., Petlenko A., Britikov D., Zubko A., Kurilov A., Dreger E., Bakuleva N. Chitosan/hyaluronic acid polyanion bilayer applied from carbon acid as an advanced coating with intelligent antimicrobial properties for improved biological prosthetic heart valves. International Journal of Biological Macromolecules. 2022; 222:2761–2774. doi: 10.1016/j.ijbiomac.2022.10.056.Perepelkin E., Sinolits M., Badun G., Chernysheva M., Anuchina N., Abramchuk S., Levin E., Bakuleva N, Popov D., Chaschin I. Composite chitosan-based nanoparticles as a basis for innovative antimicrobial coating for bioprosthesis: Preparation and application using carbonic acid as a “green” self-neutralizing solvent. European Polymer Journal. 2023; 193:112104. doi:10.1016/j.eurpolymj.2023.112104.Perepelkin E., Sinolits M., Badun G., Chernysheva M., Anuchina N., Abramchuk S., Levin E., Bakuleva N, Popov D., Chaschin I. Composite chitosan-based nanoparticles as a basis for innovative antimicrobial coating for bioprosthesis: Preparation and application using carbonic acid as a “green” self-neutralizing solvent. European Polymer Journal. 2023; 193:112104. doi:10.1016/j.eurpolymj.2023.112104.Kashin A.S., Ananikov V.P. A SEM study of nanosized metal films and metal nanoparticles obtained by magnetron sputtering. Russ. Chem. Bull. 2011; 60:2602–2607. doi:10.1007/s11172-011-0399-x.Kashin A.S., Ananikov V.P. A SEM study of nanosized metal films and metal nanoparticles obtained by magnetron sputtering. Russ. Chem. Bull. 2011; 60:2602–2607. doi:10.1007/s11172-011-0399-x.Gallyamov M. O., Chaschin I. S., Bulat M. V., Bakuleva N. P., Badun G. A., Chernysheva M. G., Kiselyova O. I., Khokhlov A.R.. Chitosan coatings with enhanced biostability in vivo. J. Biomed. Mater. Res. B Appl. Biomater. 2018; 106:270-277. doi:10.1002/jbm.b.33852.Gallyamov M. O., Chaschin I. S., Bulat M. V., Bakuleva N. P., Badun G. A., Chernysheva M. G., Kiselyova O. I., Khokhlov A.R.. Chitosan coatings with enhanced biostability in vivo. J. Biomed. Mater. Res. B Appl. Biomater. 2018; 106:270-277. doi:10.1002/jbm.b.33852.Chanda J. Prevention of calcification of heart valve bioprostheses: an experimental study in rat. The Annals of Thoracic Surgery. 1995;60:S339–S342. doi:10.1016/0003-4975(95)00256-K.Chanda J. Prevention of calcification of heart valve bioprostheses: an experimental study in rat. The Annals of Thoracic Surgery. 1995;60:S339–S342. doi:10.1016/0003-4975(95)00256-K.Бокерия Л.А., Бакулева Н.П., Костава В.Т., Гамзазаде А.И., Галлямов М.О., Хохлов А.Р.; Государственное учреждение Научный центр сердечно-сосудистой хирургии им. А.Н. Бакулева Российской академии медицинских наук. Способ химической обработки ксеноперикарда. Патент № 2008112997/15 РФ, МПК A 61 L 27/36, A 61 F 2/24; заявл. 07.04.2008 ; опубл. 20.03.2010, Бюл. № 8.Bokerija L.A., Bakuleva N.P., Kostava V.T., Gamzazade A.I., Gallyamov M.O., Khokhlov A.R., Bakulev Scientific Center for Cardiovascular Surgery, RAMS. Method for chemical treatment of xenopericardium, Patent 2384348 RU. 20.03.2010. (In Russian)

The authors declare that there are no conflicts of interest present.