kpcczКомплексные проблемы сердечно-сосудистых заболеванийComplex Issues of Cardiovascular Diseases2306-12782587-9537Federal State Budgetary Institution “Research Institute for Complex Issues of Cardiovascular Diseases”10.17802/2306-1278-2020-9-2-45-52kpccz-714Research ArticleОРИГИНАЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯORIGINAL STUDIESСовременные возможности определения и применения в клинике мономера С-реактивного белкаMonomeric C-reactive protein in coronary artery diseaseЗвереваМ. Д.ZverevaM. D.

Зверева Мария Дмитриевна - лаборант-исследователь.

Ул. 3-я Черепковская, 15а, Москва, 121552

ZverevaMariaD. - laboratory assistant.

15 a, 3d Cherepkovskaya St., Moscow, 121552

zverevamd23@gmail.comhttps://orcid.org/0000-0002-5702-9037СабуроваО. С.SaburovaO. S.

Сабурова Ольга Стояновна - кандидат биологических наук, ведущий научный сотрудник.

Ул. 3-я Черепковская, 15а, Москва, 121552

Saburova Olga S. - PhD, leading researcher.

15 a, 3d Cherepkovskaya St., Moscow, 121552

https://orcid.org/0000-0001-5241-3091МельниковИ. С.MelnikovI. S.

Мельников Иван Сергеевич - младший научный сотрудник.

Ул. 3-я Черепковская, 15а, Москва, 121552

Melnikov Ivan S. - research assistant.

15 a, 3d Cherepkovskaya St., Moscow, 121552

https://orcid.org/0000-0001-8800-1670КозловС. Г.KozlovS. G.

Козлов Сергей Геннадьевич - доктор медицинских наук, ведущий научный сотрудник.

Ул. 3-я Черепковская, 15а, Москва, 121552

Kozlov Sergey G. - PhD, leading researcher.

15 a, 3d Cherepkovskaya St., Moscow, 121552

https://orcid.org/0000-0003-3878-2573ГаббасовЗ. А.GabbasovZ. A.

Габбасов Зуфар Ахнафович - доктор биологических наук, главный научный сотрудник.

Ул. 3-я Черепковская, 15а, Москва, 121552

Gabbasov Zufar A. - PhD, chief researcher.

15 a, 3d Cherepkovskaya St., Moscow, 121552

Федеральное государственное бюджетное учреждение «Национальный медицинский исследовательский центр кардиологии» Министерства здравоохранения Российской ФедерацииРоссияNational Medical Research Centre of Cardiology of the Ministry of Healthcare of the Russian FederationRussian Federation202024062020924552Copyright © Зверева М.Д., Сабурова О.С., Мельников И.С., Козлов С.Г., Габбасов З.А., 20202020Зверева М.Д., Сабурова О.С., Мельников И.С., Козлов С.Г., Габбасов З.А.Zvereva M.D., Saburova O.S., Melnikov I.S., Kozlov S.G., Gabbasov Z.A.This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.https://www.nii-kpssz.com/jour/article/view/714Цель

Цель. Разработка метода регистрации циркулирующего в крови мономера С-реактивного белка (СРБ), а также изучение уровней изоформ СРБ - нативного пентамера С-реактивного белка (нСРБ) и мономера С-реактивного белка (мСРБ) - в крови пациентов со стабильной ишемической болезнью сердца (ИБС) и острым инфарктом миокарда.

Материалы и методы

Материалы и методы. Исследовали образцы плазмы крови, полученные от 14 пациентов с острым инфарктом миокарда на вторые - третьи сутки, 22 пациентов со стабильной ИБС и 11 здоровых добровольцев. Исследование проводили при помощи проточного цитофлу-ориметра FACSCantoll и набора функциональных частиц CytometricBeadArray (BDBiosciences, США). Использовали моноклональные антитела к СРБ (клоны MOH328 и MOH372 «ИМТЕК», Россия; клон 8С8, (Sigma-Aldrich, США), поликлональные антитела к СРБ GAH-FITC («ИМТЕК»), нативный СРБ («ИмТеК») и рекомбинантный мономерный СРБ (получен в дар от доктора L. Potempa).

Результаты

Результаты. Разработана тест-система, позволившая определить уровень мономера СРБ в крови пациентов. У всех пациентов с ИБС зафиксирован повышенный уровень СРБ в плазме крови, в то время как в контрольной группе показатель был ниже определяемого порога. У пациентов со стабильной ИБС концентрация мСРБ составила 2,34 (1,42; 3,27) мкг/л, тогда как наиболее высокий уровень мСРБ отмечен у лиц с острым инфарктом миокарда - 16,76 (3,65; 54,83) мкг/л (р = 0,0002, критерий Краскела - Уоллиса ANOVA). Корреляции уровней мСРБ и показателей нСРБ, высокочувствительного С-реактивного белка и интерлейкина-6 не обнаружено.

Заключение

Заключение. Новая тест-система, позволяющая определять уровень мономера С-реактив-ного белка в крови, делает возможным исследование роли мСРБ в патогенезе и течении ИБС. Полученные результаты позволяют утверждать, что мономер С-реактивного белка может играть не меньшую роль, чем его нативная форма, в диагностике и течении кардиологических патологий, а также иных, связанных с воспалительными процессами в организме, заболеваний.

Aim

Aim. To develop a method for measuring circulating monomeric C-reactive protein and to determine the levels of C-reactive protein isoforms (native pentameric C-reactive protein and monomeric C-reactive protein) in patients with stable coronary artery diseases and acute myocardial infarction.

Methods

Methods. Plasma and blood serum samples were collected from 22 patients with stable coronary artery disease (CAD), 14 patients with acute myocardial infarction at days 2-3, and 11 healthy volunteers. The analysis was performed using flow cytofluorometry FACS Cantoll and a set of functional particles Cytometric Bead Array (BD Biosciences, USA). Antibodies for CRP (clones 328 and 372 from ImTek, Russia, and clone 8C8 from Sigma-Aldrich, USA), гСКР-GAH (with antibodies for CRP), native CRP (ImTek, Russia) and recombinant monomeric CRP (received as a gift from Dr. L. Potempa) were used in the analysis.

Results

Results. A novel laboratory kit for measuring blood levels of monomeric CRP has been developed. Patients with CAD demonstrated elevated plasma levels of CRP, whereas healthy subjects reported the levels below the lower cut-off. Patients with stable CAD had mCRP concentration of 2.34 (1.42; 3.27) pg/L, whereas patients with acute MI had the highest level of 16.76 (3.65;54.83) pg/L (p = 0.0002, Kruskal-Wallis One Way Annova). There were no any correlations between mCRP levels and nCRP, hs-CRP and IL-6.

Conclusion

Conclusion. The novel laboratory kit allows measuring monomeric C-reactive protein and provides novel data on the role of mCRP in the development and progress of CAD. Obtained data suggest that monomeric C-reactive protein can play no less important role than native C-reactive protein in the diagnosis and progress of cardiovascular diseases as well as other diseases associated with the inflammatory process.

Ишемическая болезнь сердцаС-реактивный белокМономерный С-реактивный белокОстрый инфаркт миокардаCoronary artery diseaseC-reactive proteinmCRPAcute myocardial infarctionMonomeric C-reactive protein in coronary artery diseaseReferencesТитов В.Н., Ощепкова Е.В., Дмитриев В.А. С-ре-активный белок, микроальбуминурия, эндогенное воспаление и артериальная гипертония. М.: ППП «Типография «Наука», 2009.Titov V.N., Oshchepkova E.V., Dmitriev V.A. S-reaktivnyj belok, mikroal'buminuriya, endogennoe vospalenie i arterial'naya gipertoniya. Moscow, 2009. (In Russian)Сумарков А. Б., Наумов В. Г., Масенко В. П. С-ре-активный белок и сердечно-сосудистая патология. Тверь: Триада, 2006.Sumarkov A. B., Naumov V G., Masenko V. P. S-reaktivnyj belok i serdechno-sosudistaya patologiya. Tver', 2006. (In Russian)Melnikov I.S., Kozlov S.G., Saburova O.S., Avtaeva YN., Prokofieva L.V., Gabbasov Z.A. Current Position on the Role of Monomeric C-reactive Protein in Vascular Pathology and Atherothrombosis. Curr Pharm Des. 2020; 26(1): 37-43. doi: 10.2174/1381612825666191216144055.Melnikov I.S., Kozlov S.G., Saburova O.S., Avtaeva YN., Prokofieva L.V., Gabbasov Z.A. Current Position on the Role of Monomeric C-reactive Protein in Vascular Pathology and Atherothrombosis. Curr Pharm Des. 2020; 26(1): 37-43. doi: 10.2174/1381612825666191216144055.Slevin M., Matou-Nasri S., Turu M., Luque A., Rovira N., Badimon L., et al. Modified C-reactive protein is expressed by stroke neovessels and is a potent activator of angiogenesis in vitro. Brain Pathology. 2010;20(1):151-165. doi: 0.1111/j.1750-3639.2008.00256.x.Slevin M., Matou-Nasri S., Turu M., Luque A., Rovira N., Badimon L., et al. Modified C-reactive protein is expressed by stroke neovessels and is a potent activator of angiogenesis in vitro. Brain Pathology. 2010;20(1):151-165. doi: 0.1111/j.1750-3639.2008.00256.x.Pearson T.A., Mensah G.A., Alexander R.W., Anderson J.L., Cannon R.O., Criqui M., et al. Markers of inflammation and cardiovascular disease: application to clinical and public health practice: a statement for healthcare professionals from the Centers for Disease Control and Prevention and the American Heart Association. Circulation 2003;107:499-511. doi: 10.1161/01.cir.0000052939.59093.45.Pearson T.A., Mensah G.A., Alexander R.W., Anderson J.L., Cannon R.O., Criqui M., et al. Markers of inflammation and cardiovascular disease: application to clinical and public health practice: a statement for healthcare professionals from the Centers for Disease Control and Prevention and the American Heart Association. Circulation 2003;107:499-511. doi: 10.1161/01.cir.0000052939.59093.45.McFadyen J.D., Zeller J., Potempa L.A., Pietersz G.A., Eisenhardt S.U., Peter K. (2020) C-Reactive Protein and Its Structural Isoforms: An Evolutionary Conserved Marker and Central Player in Inflammatory Diseases and Beyond. In: Vertebrate and Invertebrate Respiratory Proteins, Lipoproteins and other Body Fluid Proteins eds. Hoeger U., Harris J. Springer Nature, 2020. p. 499-520. doi: https://doi.org/10.1007/978-3-030-41769-7_20McFadyen J.D., Zeller J., Potempa L.A., Pietersz G.A., Eisenhardt S.U., Peter K. (2020) C-Reactive Protein and Its Structural Isoforms: An Evolutionary Conserved Marker and Central Player in Inflammatory Diseases and Beyond. In: Vertebrate and Invertebrate Respiratory Proteins, Lipoproteins and other Body Fluid Proteins eds. Hoeger U., Harris J. Springer Nature, 2020. p. 499-520. doi: https://doi.org/10.1007/978-3-030-41769-7_20Potempa L.A., Maldonado B.A., Laurent P., Zemel E.S., Gewurz H. Antigenic, electrophoretic and binding alterations of human C-reactive protein modified selectively in the absence of calcium. Mol Immunol. 1983; 20(11):1165-75. doi: 10.1016/0161-5890(83)90140-2Potempa L.A., Maldonado B.A., Laurent P., Zemel E.S., Gewurz H. Antigenic, electrophoretic and binding alterations of human C-reactive protein modified selectively in the absence of calcium. Mol Immunol. 1983; 20(11):1165-75. doi: 10.1016/0161-5890(83)90140-2Wang M.Y., Ji S.R., Bai C.J., El Kebir D., Li H.Y, Shi J.M., Zhu W., Costantino S., Zhou H.H., Potempa L.A., Zhao J., Filep J.G., Wu Y A redox switch in C-reactive protein modulates activation of endothelial cells. FASEB J. 2011; 25(9): 3186-96. doi: 10.1096/fj.11-182741Wang M.Y., Ji S.R., Bai C.J., El Kebir D., Li H.Y, Shi J.M., Zhu W., Costantino S., Zhou H.H., Potempa L.A., Zhao J., Filep J.G., Wu Y A redox switch in C-reactive protein modulates activation of endothelial cells. FASEB J. 2011; 25(9): 3186-96. doi: 10.1096/fj.11-182741Lv J.M., Wang M.Y. In vitro generation and bioactivity evaluation of C-reactive protein intermediate. PLoS One. 2018; 13(5): e0198375. doi: 10.1371/journal.pone.0198375.Lv J.M., Wang M.Y. In vitro generation and bioactivity evaluation of C-reactive protein intermediate. PLoS One. 2018; 13(5): e0198375. doi: 10.1371/journal.pone.0198375.Braig D., Nero T.L., Koch H.G., Kaiser B., Wang X., Thiele J.R., Morton C.J., Zeller J., Kiefer J., Potempa L.A., Mellett N.A., Miles L.A., Du X.J., Meikle PJ., Huber-Lang M. , Stark G.B., Parker M.W., Peter K., Eisenhardt S.U. Transitional changes in the CRP structure lead to the exposure of proinflammatory binding sites. Nat Commun. 2017; 8:14188. doi: 10.1038/ncomms14188Braig D., Nero T.L., Koch H.G., Kaiser B., Wang X., Thiele J.R., Morton C.J., Zeller J., Kiefer J., Potempa L.A., Mellett N.A., Miles L.A., Du X.J., Meikle PJ., Huber-Lang M., Stark G.B., Parker M.W., Peter K., Eisenhardt S.U. Transitional changes in the CRP structure lead to the exposure of proinflammatory binding sites. Nat Commun. 2017; 8:14188. doi: 10.1038/ncomms14188Thiele J.R., Habersberger J., Braig D., Schmidt Y, Goerendt K., Maurer V, Bannasch H., Scheichl A., Woollard K.J., von Dobschutz E., Kolodgie F., Virmani R., Stark G.B., Peter K., Eisenhardt S.U. Dissociation of pentameric to monomeric C-reactive protein localizes and aggravates inflammation: in vivo proof of a powerful proinflammatory mechanism and a new anti-inflammatory strategy. Circulation. 2014; 130(1): 3550. doi: 10.n61/CIRCULATIONAHA.n3.007124.Thiele J.R., Habersberger J., Braig D., Schmidt Y, Goerendt K., Maurer V, Bannasch H., Scheichl A., Woollard K.J., von Dobschutz E., Kolodgie F., Virmani R., Stark G.B., Peter K., Eisenhardt S.U. Dissociation of pentameric to monomeric C-reactive protein localizes and aggravates inflammation: in vivo proof of a powerful proinflammatory mechanism and a new anti-inflammatory strategy. Circulation. 2014; 130(1): 3550. doi: 10.1161/CIRCULATIONAHA.113.007124.Habersberger J., Strang F., Scheichl A., Htun N., Bassler N. , Merivirta R.M., Diehl P., Krippner G., Meikle P., Eisenhardt S.U., Meredith I., Peter K. Circulating microparticles generate and transport monomeric C-reactive protein in patients with myocardial infarction. Cardiovasc Res. 2012; 96(1): 64-72. doi: 10.1093/cvr/cvs237.Habersberger J., Strang F., Scheichl A., Htun N., Bassler N., Merivirta R.M., Diehl P., Krippner G., Meikle P., Eisenhardt S.U., Meredith I., Peter K. Circulating microparticles generate and transport monomeric C-reactive protein in patients with myocardial infarction. Cardiovasc Res. 2012; 96(1): 64-72. doi: 10.1093/cvr/cvs237.Williams R.D., Moran J.A., Fryer A.A., Littlejohn J.R., Williams H.M., Greenhough T.J., Shrive A.K. Monomeric C-Reactive Protein in Serum With Markedly Elevated CRP Levels Shares Common Calcium-Dependent Ligand Binding Properties With an in vitro Dissociated Form of C-Reactive Protein. Front. Immunol. 2020; 11: 115. doi: 10.3389/fimmu.2020.00115.Williams R.D., Moran J.A., Fryer A.A., Littlejohn J.R., Williams H.M., Greenhough T.J., Shrive A.K. Monomeric C-Reactive Protein in Serum With Markedly Elevated CRP Levels Shares Common Calcium-Dependent Ligand Binding Properties With an in vitro Dissociated Form of C-Reactive Protein. Front. Immunol. 2020; 11: 115. doi: 10.3389/fimmu.2020.00115.Habersberger J., Strang F., Scheichl A., Htun N., Bassler N., Merivirta R.M. et al. Circulating microparticles generate and transport monomeric C-reactive protein in patients with myocardial infarction. Cardiovasc Res 2012; 96(1): 64-72. doi: 10.1093/cvr/cvs237.Habersberger J., Strang F., Scheichl A., Htun N., Bassler N., Merivirta R.M. et al. Circulating microparticles generate and transport monomeric C-reactive protein in patients with myocardial infarction. Cardiovasc Res 2012; 96(1): 64-72. doi: 10.1093/cvr/cvs237.

The authors declare that there are no conflicts of interest present.